ایک اچھاخوردبینتین خصوصیات ہونی چاہئیں:
اچھی ریزولیوشن: ریزولوشن کی قابلیت سے مراد قریب سے رکھی گئی اشیاء کی الگ الگ تصاویر بنانے کی صلاحیت ہے تاکہ انہیں دو الگ الگ اداروں کے طور پر پہچانا جا سکے۔ قرارداد:
تقریباً 0.2 ملی میٹر (200μm) ننگی آنکھ تک
آپٹیکل خوردبین تقریباً 0.2μm ہے۔
الیکٹران مائکروسکوپی تقریباً 0.5 nm ہے۔
. ریزولوشن ریفریکٹیو انڈیکس پر منحصر ہے۔ تیل میں ہوا سے زیادہ ریفریکٹیو انڈیکس ہوتا ہے۔
اچھا کنٹراسٹ: نمونے کو داغ لگا کر مزید بہتر کیا جا سکتا ہے۔
اچھی میگنیفیکیشن: یہ مقعر لینز کا استعمال کرکے حاصل کیا جاتا ہے۔
برائٹ فیلڈ یا لائٹ مائکروسکوپی
برائٹ فیلڈ یا ہلکی مائکروسکوپی ہلکے پس منظر کے خلاف تاریک تصاویر تیار کرتی ہے۔
تاریک فیلڈ مائکروسکوپی
اصول: ڈارک فیلڈ مائیکروسکوپی میں، اشیاء سیاہ پس منظر کے خلاف روشن دکھائی دیتی ہیں۔ یہ خصوصی ڈارک فیلڈ کنڈینسر استعمال کرکے حاصل کیا جاسکتا ہے۔
ایپلی کیشنز: قابل عمل، غیر داغدار خلیات اور پتلی بیکٹیریا جیسے اسپیروچائٹس کی شناخت کے لیے استعمال کیا جاتا ہے جن کا ہلکی مائکروسکوپی سے مشاہدہ نہیں کیا جا سکتا۔
مرحلے کے برعکس خوردبین
یہ خلیات اور پانی کے درمیان متضاد فرق پیدا کرکے زندہ خلیوں کا تصور کرتا ہے۔ یہ اضطراری انڈیکس اور سیل کثافت میں ٹھیک ٹھیک فرق کو روشنی کی شدت میں آسانی سے قابل شناخت تبدیلیوں میں تبدیل کرتا ہے۔
مطالعہ کے لیے مفید:
مائکروبیل تحریک
زندہ خلیوں کی شکل کا تعین کریں۔
بیکٹیریل اجزاء کا پتہ لگائیں جیسے اینڈو اسپورس اور انکلوژن باڈیز۔
فلوروسینس خوردبین
یہ کیسے کام کرتا ہے: جب فلوروسینٹ رنگ الٹراوائلٹ (UV) روشنی کے سامنے آتے ہیں، تو وہ پرجوش ہوتے ہیں اور فلوروسیس ہوتے ہیں، یعنی وہ اس غیر مرئی، مختصر طول موج کی کرن کو لمبی طول موج کی روشنی (مرئی روشنی) میں تبدیل کر دیتے ہیں۔
ایپلی کیشنز: ایپی فلوروسینس مائکروسکوپی میں درج ذیل ایپلی کیشنز ہیں:
آٹو فلوروسیس جب UV روشنی کے نیچے رکھا جاتا ہے، جیسے سائکلوسپورین
مائکروجنزم فلوروسینٹ رنگوں کے ساتھ لیپت ہیں، جیسے ملیریا پرجیویوں کے لیے ایٹریول اورنج (QBC) اور مائکوبیکٹیریم تپ دق کے لیے اورینول۔
امیونو فلوروسینس: یہ سیل کی سطح کے اینٹیجنز یا اینٹی باڈیز کا پتہ لگانے کے لیے فلوروسینٹ رنگوں کے لیبل والے اینٹی باڈیز کا استعمال کرتا ہے جو سیل کی سطح کے اینٹیجنز سے منسلک ہوتے ہیں۔ تین قسمیں ہیں: براہ راست IF، بالواسطہ IF، اور فلو cytometry۔
الیکٹران خوردبین
اسے 1931 میں ارنسٹ روسکا نے ایجاد کیا تھا۔ یہ ہلکی مائکروسکوپی سے مختلف طریقے سے مختلف ہے۔
EM کی دو قسمیں ہیں:
ٹرانسمیشن EM (MC قسم، اندرونی ساخت کی جانچ کرتا ہے، ریزولوشن 0.5 nm، دو جہتی منظر دیتا ہے)
سکیننگ EM (7 nm کی ریزولوشن کے ساتھ سطح کی جانچ کرتا ہے، 3D منظر فراہم کرتا ہے)
ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی کے اصول
نمونے کی تیاری: بہت پتلے نمونے (20 سے 100 ینیم موٹی) تیار کرنے کے لیے سیلز پر درج ذیل اقدامات کریں۔
درستگی: خلیوں کو مستحکم کرنے کے لیے گلوٹرالڈہائیڈ یا ٹیٹرو آکسائیڈ کا استعمال کرتے ہوئے درست کریں۔
پانی کی کمی: اس کے بعد نمونے کو نامیاتی سالوینٹ جیسے ایسٹون یا ایتھنول کا استعمال کرتے ہوئے پانی کی کمی کی جاتی ہے۔
سرایت کرنا: نمونہ ایک پلاسٹک پولیمر میں سرایت کرتا ہے، جو پھر ٹھوس ماس بنانے کے لیے سخت ہو جاتا ہے۔ زیادہ تر پلاسٹک پولیمر پانی میں گھلنشیل ہوتے ہیں۔ لہذا، سرایت کرنے سے پہلے نمونے کو مکمل طور پر پانی کی کمی سے دوچار ہونا چاہیے۔
سیکشننگ: اس کے بعد نمونہ کو الٹرا مائیکروٹوم کے ساتھ پتلے حصوں میں کاٹا جاتا ہے اور ان حصوں کو دھاتی سلائیڈوں (تانبے) پر لگایا جاتا ہے۔
منجمد اینچنگ تکنیک: نمونہ کی تیاری کے لیے خلیوں کے اندر آرگنیلز کو دیکھنے کا یہ ایک متبادل طریقہ ہے۔
خلیات کو جلدی سے منجمد کیا جاتا ہے، پھر گرم کیا جاتا ہے → چاقو کا استعمال کرتے ہوئے پھٹ جاتا ہے تاکہ اندرونی اعضاء کو بے نقاب کیا جا سکے → سبلیمیٹڈ → پلاٹینم اور کاربن کوٹنگز سے ڈھکے۔
EM کنٹراسٹ کو بہتر بنانے کے اقدامات میں شامل ہیں:
بھاری دھاتی نمکیات جیسے لیڈ سائٹریٹ اور یورینیل ایسیٹیٹ کے محلول کے ساتھ داغ لگانا
بھاری دھاتوں جیسے فاسفوٹونگسٹک ایسڈ یا یورینیل ایسیٹیٹ کے ساتھ منفی داغ۔
شیڈنگ: نمونہ کو 45 ڈگری کے زاویے پر پلاٹینم یا دیگر بھاری دھات کی پتلی فلم کے ساتھ لیپت کیا جاتا ہے تاکہ دھات صرف ایک طرف سے مائکروجنزموں سے ٹکرائے۔
